Պոլիակրիլամիդային գել էլեկտրոֆորեզի նախազգուշական միջոցներ

· պոլիակրիլամիդԳելը պետք է պարունակի ակրիլամիդային մոնոմեր, պոլիմերացման մեկնարկային նյութ, կատալիզատոր և աղի ու բուֆերային խառնուրդի միացություն։

· ակրիլամիդև BIS-ը (N, N'-մեթիլեն կրկնակի ակրիլամիդ) մոնոմերի տեսքով գելային մատրից է։

· ամոնիումի պերսուլֆատը սկսում է սոսնձի պոլիմերացման գործընթացը: Սոսինձի պատրաստման համար անհրաժեշտ է ջրում պատրաստված ամոնիումի պերսուլֆատի 10% լուծույթ: Տեղեկատվության մեծ մասը ցույց է տալիս ակտիվ օգտագործման անհրաժեշտությունը: Այնուամենայնիվ, 10% լուծույթը կարող է պահվել 4°C ջերմաստիճանում մի քանի շաբաթ՝ առանց ակտիվության զգալի կորստի: Լրացրեք մինչև 10 մլ և դեն նետեք, երբ սոսինձը չի կարողանում ագուցվել:

Հուշում. տոկոսըակրիլամիդՀաջորդականության մեջ սոսինձը և սպիտակուցային սոսինձը նույնը չեն: Եթե օգտագործում եք նախապես պատրաստված ակրիլամիդի BIS լուծույթ, համոզվեք, որ ձեռք եք բերում ճիշտ շիշը:

· TEMED-ը (N, N, N', N'- տետրամեթիլ էթիլենդիամին) կատալիզատոր է, շագանակագույն շշի մեջ, դրված սառնարանում: Ավելացրեք սոսինձը լցնելուց անմիջապես առաջ:

· Էլեկտրոֆորեզում օգտագործված պոլիակրիլամիդային էլեկտրոֆորեզի դեպքում ապակին պետք է լվանալ յուրաքանչյուր անգամից առաջ և հետո։ Էլեկտրոֆորեզից հետո լվանալ փափուկ խոզանակով և կտորով տաք օճառաջրով, լվանալ թորած ջրով և թողնել չորանա։

· Խոնավություն և փոշի կարող է առաջացնել խոռոչ պոլիմերը։ Էլեկտրոֆորեզից առաջ մաքրեք ապակե թիթեղը ապակու մաքրող միջոցով և սրբեք այն փափուկ խոզանակով։ Լվացեք թորած ջրով և մանրակրկիտ չորացրեք թղթե սրբիչով։ Թղթով սրբելուց առաջ 70% էթանոլով լվանալը կօգնի մաքրմանը և արագացնել չորացումը։ Հաջորդաբար ավելացրեք ակրիլամիդի նմուշներ՝ BIS, ջուր, բուֆերային լուծույթ, ամոնիումի պերսուլֆատ, TEMED։ Լավ թափահարեք և անմիջապես լցրեք։

Պոլիմերացումից առաջ պոլիակրիլամիդը գազազերծելու կարիք չկա։ (Ակրիլամիդը նախկինում տեղադրվում էր վակուումի մեջ՝ փուչիկները հեռացնելու համար, քանի որ թթվածինը կանխում է պոլիմերացումը):

Հորիզոնական սոսնձի կետի նմուշային ծայրեր։

· Սև թղթի մի կտոր դրեք ներքևի տուփի մեջ, սև ֆոնի վրա մի քանի անցք արեք՝ ավելի պարզ տեսնելու համար։
· սոսնձի տարայով լցված բուֆեր, կոլոիդի վրայից անմիջապես վերև։
· եթե եզրը լույս ունի, միացրեք լույսը, թողեք, որ կոլոիդային լույսը շողա։ Նմուշը քաշեք պիպետի մեջ։
· ավտոմատ պիպետացման սարքի միջոցով։
· 10-200 մյու 1 հեղուկի շարժման կետում կարելի է օգտագործել նմուշի վրա գտնվող կետերի մեծ մասում: Շատ փոքր նմուշի անցքերի համար (10μ1-ից պակաս) ավելի հարմար է սոսինձի հաջորդականության համար օգտագործվող երկար պիպետային գլխիկը:

· պիպետի միջոցով պարզապես ընկղմվելով նմուշի մեջ՝ ներշնչելով դանդաղ շարժվող հեղուկը: Նմուշը կարող է կպչուն թվալ գլիցերինի հետ, իսկ արագ մղումը կարող է օդային պղպջակներ ներքաշել պիպետի գլխիկի մեջ:

· Պիպեցման գլխիկը ներշնչելուց հետո նմուշները հեղուկի գլխիկը նրբորեն կշարժեն խողովակի եզրով կամ սրբիչ թղթով կծծեն հեղուկի գլխիկը կաթիլներից դուրս։ Զգույշ եղեք, որ նմուշը չծծեք։

Տեղադրեք նմուշը նմուշի անցքի մեջ

· Պիպեցման սարք՝ մի փոքր ճնշում պահպանելու համար, որպեսզի նմուշները մի փոքր շարժվեն լցված հեղուկի գլխիկի վրա։
· բուֆերի մեջ տեղադրված պիպետի գլխիկը, որը մի փոքր ավելի բարձր է կետային անցքերից, պահպանում է դրական ճնշումը: Պիպետի ծայրը կարելի է մտցնել փոքր անցքի մեջ:
· դանդաղ և կայուն կերպով դուրս հանեք նմուշները։ Պիպետի ծայրը տեղադրվում է նմուշի կետային անցքի վերևում, և նմուշը կխորտակվի անցքի մեջ։ Թողեք, որ նմուշը խորտակվի՝ նմուշի անցքը լցնելու համար, այլ ոչ թե ներս մղեք։
· Հեղուկի գլխիկի հետ նմուշի վերջին կաթիլից հետո հեղուկը կտեղափոխվի երկրորդ ոտք, դանդաղ բարձրացրեք հեղուկը, շարժվեք բուֆերից դուրս

Ինչպե՞ս անել ուղղահայաց սոսինձի նմուշառում:

· Երկու ապակու կտորների միջև ձևավորված ուղղահայաց սոսնձի կետի նմուշի անցքեր: Շատ բարակ սոսինձի դեպքում պիպետի գլխիկը նույնիսկ չի կարող տեղադրվել երկու ապակե թիթեղների միջև: Ուշադրություն դարձրեք գլիցերինին: Դրեք պիպետի գլխիկը նմուշի անցքի վրա, և նմուշը կխրվի անցքի մեջ:
· Նմուշը դնելուց առաջ համոզվեք, որ ուղղահայաց կետում պոլիպրոպիլենային ացիլ գել է դրված, որպեսզի նմուշի անցքը մաքուր լվացվի։ Լվացեք չպոլիմերացված ակրիլամիդը և ջուրը, որը կարող է հայտնվել նմուշի անցքի հատակին։ Ջուրը կարող է զգալիորեն փոքրացնել նմուշի անցքը։ Օգտագործեք 25 կամ 50 մլ ներարկիչ և 18 տրամաչափի ասեղ։ Լցրեք էլեկտրոֆորեզի բուֆերը և զգուշորեն լվացեք նմուշի անցքը։
· նմուշի անցքը տեսնելը կարող է դժվար լինել, բայց միևնույն ժամանակ մնացածը հեշտ է։ Եթե կան ավելորդ անցքեր, նմուշի բուֆերը կարող է փորձարկվել բրոմֆենոլ կապույտով։